多肽抗原南京肽業(yè)

多肽抗原方案設(shè)計(jì)

難于獲得困難、分子量小、同源性較高不易與其他區(qū)分的抗原，我們可以考慮采用多肽合成方法制備抗原；多肽抗原為半抗原，必須與載體偶聯(lián)形成*抗原才可以免疫動(dòng)物。多肽抗原方案制備抗體核心是多肽選取與抗原表位的設(shè)計(jì)。多肽設(shè)計(jì)前首先對(duì)抗原蛋白進(jìn)行系統(tǒng)分析，分析方法與原核重組表達(dá)蛋白相同，在此不做贅述。

1．多肽設(shè)計(jì)通用原則

u  外源性原則：

設(shè)計(jì)多肽序列與被免疫宿主蛋白序列不同源（Blast檢索）。

u  特異性原則：

設(shè)計(jì)多肽序列與自身物種其他蛋白序列不同源（Blast檢索）。

u  親水性原則：

蛋白質(zhì)都是將親水部分暴露在外，只有抗原更好的溶于水相才能更好地激發(fā)免疫反應(yīng)，因此設(shè)計(jì)的多肽一定要親水性好（通過(guò)DNassist，GCG，ProtScale等軟件預(yù)測(cè)親水性）。

u  C末端性原則

末端肽段比內(nèi)部肽段暴露性更好，更容易制備抗體，但膜蛋白C端疏水性比較強(qiáng)，一般選擇N端多肽。

u  結(jié)構(gòu)原則

序列不形成α-helix、內(nèi)部重復(fù)或接近重復(fù)段的序列。

u  氨基酸原則

 序列內(nèi)Pro(脯氨酸)一般不超過(guò)2個(gè)；同時(shí)盡量包括MHC類(lèi)分子偏好的Asp，Tyr，Phe等氨基酸，避免容易發(fā)生糖基化的氨基酸（如Asn、 Ser 、Thr和Hyp）和磷酸化的氨基酸（Ser、Thr和Tyr）。

u  連接臂原則

一般在肽鏈上加一個(gè)聯(lián)接臂便于多肽與載體偶聯(lián)，常用的是加Cys的-SH，加在對(duì)抗體產(chǎn)生影響小的那一端：選擇N末端多肽序列的加在多肽C端；選擇C末端序列則-SH加在N端，選擇中間肽段加在對(duì)抗體制備影響比較小的那一端。

u  長(zhǎng)度原則

抗原表位一般是6～8個(gè)氨基酸組成，多肽做抗原的時(shí)候一般設(shè)計(jì)15～20個(gè)氨基酸，一方面為防止蛋白質(zhì)水解，另一方面為了保證表位覆蓋率。鏈太長(zhǎng)則易造成鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu)，同時(shí)增加合成的成本。

u  純度原則

用于制備抗體的多肽，85%以上的純度就足夠了，純度越高合成的成本越高。

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